分享:針對液相色譜柱常見幾種問題的解決方案

　　1.柱壓問題柱壓問題是使用高效液相色譜過程中需要密切注意的地方，柱壓的穩(wěn)定與色譜圖峰形的好壞、柱效、分離效果及保留時間等密切相關(guān)。

　　1.1壓力過高：

　　這是高效液相在使用中最常見的問題，指的是壓力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時，我們應(yīng)該分段進(jìn)行檢查。

　　（1）首先斷開真空泵的入口處，此時，PEEK管里充滿液體，使PEEK管低于溶劑瓶，看液體是否自由滴下，如果，液體不滴或緩慢滴下，則是溶劑過濾頭堵塞。

　　處理方法：

　　用30%的硝酸浸泡半個小時，在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下，溶劑過濾頭正常，再檢查；

　　（2）打開Purge閥，使流動相不經(jīng)過柱子，如果壓力沒有明顯下降，則是過濾白頭堵塞。

　　處理方法：

　　將過濾白頭取出，用10%的異丙醇超聲半個小時。如果壓力降至100PSI（6.7Bar）以下，過濾白頭正常，再檢查；

　　（3）把色譜柱出口端取下，如果壓力不下降，則是柱子堵塞。

　　處理方法：

　　如果是緩沖鹽堵塞，則用95%的水沖至壓力正常。如果是一些強(qiáng)保留的物質(zhì)導(dǎo)致堵塞，則要用比現(xiàn)在流動相更強(qiáng)的流動相沖至壓力正常。

　　假如，按上面的方法長時間沖洗壓力都不下降，則可考慮將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上，用流動相沖洗柱子。這時，如果柱壓仍不下降，只有換柱子入口篩板，但是，一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以，盡量少用。

　　1.2壓力過低

　　壓力過低的現(xiàn)象一般是由于系統(tǒng)泄漏

　　處理方法：

　　尋找各個接口處，特別是色譜柱兩端的接口，把泄漏的地方旋緊即可。當(dāng)然，還有一個原因就是泵里進(jìn)了空氣，但此時表現(xiàn)的往往是壓力不穩(wěn)，忽高忽低，更嚴(yán)重一點(diǎn)會導(dǎo)致泵無法吸上液體。

　　處理方法：

　　打開Purge閥，用3～5mL/min的流速沖洗，如果不行，則要用專用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出。

　　2.漂移問題主要包括基線漂移和保留時間漂移。

　　2.1基線漂移

　　一般說來，機(jī)器剛起動時，基線容易漂移，大概要半個小時的平衡時間，如果，你用了緩沖溶液或緩沖鹽，還有就是在低波長下（220nm）平衡時間相對會比較長，但是，如果你在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)基線漂移，則你要考慮下面的原因：

　　①紫外燈能量不足。

　　解決方法：

　　更換新的紫外燈；

　　②柱溫波動。

　　解決方法：

　　控制好柱子和流動相的溫度，檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對著柱溫箱。

　　③流通池被污染或有氣體。

　　解決方法：

　　用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池（最好斷開柱子）。如有需要，可以用1N的硝酸（不要用鹽酸）。

　　④流動相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成。

　　解決方法：

　　檢查流動相的組成，使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級的溶劑。

　　⑤樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)（高K'值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而，表現(xiàn)出一個逐步升高的基線。

　　解決方法：

　　使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之間。在分析過程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。

　　⑥檢測器沒有設(shè)定在最大吸收波長處。

　　解決方法：

　　將波長調(diào)整至最大吸收波長處；

　　⑦流動相的pH值沒有調(diào)節(jié)好。

　　解決方法：

　　加適量的酸或堿調(diào)至最佳pH值；

　　2.2保留時間漂移

　　保留時間重現(xiàn)是液相性能好壞的一個重要標(biāo)志，同一種東西，兩次的保留時間相差不要超過15s，超過了半分鐘可看做保留時間漂移，就無法進(jìn)行定性，你要考慮以下原因：

　　①溫控不當(dāng)。

　　解決方法：

　　調(diào)好柱溫，檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對著柱溫箱。

　　②流動相比例變化。

　　解決方法：

　　檢查四元泵的比例閥是否有故障。

　　③色譜柱沒有平衡。

　　解決方法：

　　在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時間平衡色譜柱。

　　④流速變化。

　　解決方法：

　　重新設(shè)定流速。

　　⑤泵中有氣泡。

　　解決方法：

　　從泵中除去氣泡。

　　2.3峰型異常問題

　　峰型問題是液相的主要問題，在做液相過程中，我們就是要變換不同的條件來改善不好的峰型，對于各種各樣的異常峰，要區(qū)別對待，從主要問題出發(fā)，一個一個加以解決。

　　①所有峰均為寬峰。

　　解決方法：

　　系統(tǒng)未達(dá)到平衡；

　　溶解樣品的溶劑極性比流動相差很多；

　　色譜柱尺寸及類型選擇不正確；

　　色譜柱或保護(hù)柱被污染或柱效降低；

　　溫度變化造成的影響。

　　②所出峰比預(yù)想的小。

　　解決方法：

　　樣品黏度過大；進(jìn)樣品故障或進(jìn)樣體積誤差；檢測器設(shè)置不正確，定量環(huán)體積不正確；檢測池污染；檢測器燈出現(xiàn)問題。

　　③色譜圖中未出峰。

　　解決方法：

　　系統(tǒng)未進(jìn)樣或樣品分解；

　　泵未輸液或流動相使用不正確；

　　檢測器設(shè)置不正確；

　　針對以上情況成因作相應(yīng)調(diào)整即可。。。

　　④一個峰或幾個峰是負(fù)峰。

　　解決方法：

　　流動相吸收本底高；進(jìn)樣過程中進(jìn)入空氣；樣品組分的吸收低于流動相。

　　⑤所有峰均為負(fù)峰。

　　解決方法：

　　信號電纜接反或檢測器輸出極性設(shè)置顛倒；

　　光學(xué)裝置尚未達(dá)到平衡。

　　⑥出現(xiàn)雙峰或肩峰。

　　解決方法：

　　進(jìn)樣量過大；樣品濃度過高；

　　保護(hù)柱或色譜柱柱頭堵塞；

　　保護(hù)拄或色譜柱污染或失效；

　　柱塌陷或形成短通道。

　　⑦前伸峰。

　　解決方法：

　　進(jìn)樣量或樣品濃度高；

　　溶解樣品的溶劑較流動。