液相色譜柱中常見的故障及解決辦法

　　高效液相作為一種高精密儀器，如果在使用過程中不按照正確操作的話，就容易導(dǎo)致一些問題。其中常見的就是柱壓問題、漂移問題、峰型異常問題。

　　一、柱效

　　柱效是色譜柱性能的評估標(biāo)準(zhǔn)，測試色譜柱效需*按照出廠測試報(bào)告的條件進(jìn)行測試，考慮儀器、上樣量、柱外體積、采集頻率等因素的影響。

　　當(dāng)柱效降低時(shí)可能的原因及解決方法：

　　1、保護(hù)柱失效，需更換保護(hù)柱；

　　2、長期使用后，柱效低，屬正?，F(xiàn)象，日常使用后加強(qiáng)維護(hù)；

　　3、樣品前處理不足，需加強(qiáng)樣品前處理；

　　4、流動相過濾不好，需加強(qiáng)流動相過濾。

　　二、分離度

　　不同批次的色譜柱，新柱比舊柱分離度差，可能的原因及解決方法：

　　1、考慮方法是否適用，因此方法開發(fā)需采用新柱，方法驗(yàn)證需采用三支同型號色譜柱；

　　2、新柱柱效或選擇性有差，需更換色譜柱。

　　柱子的分離度逐漸降低，可能的原因及解決方法：

　　1、色譜柱污染，需增加保護(hù)柱，或加強(qiáng)樣品或流動相前處理，或?qū)ιV柱進(jìn)行沖洗及再生；

　　2、色譜柱塌陷或鍵合相流失，需更換色譜柱。

　　三、峰型

　　峰前沿，可能的原因及解決方法：

　　1、溶劑效應(yīng)，需使用流動相稀釋樣品；

　　2、過載，需減少進(jìn)樣量或進(jìn)樣體積；

　　3、共流出，需確認(rèn)樣品的穩(wěn)定性，或調(diào)整流動相使共流出組分分離；

　　4、柱污染，需加保護(hù)柱，或加強(qiáng)樣品或流動相前處理或色譜柱沖洗及再生；

　　5、柱塌陷，需更換色譜柱；

　　6、柱外效應(yīng)，需重新連接色譜柱，或更換連接管路。

　　峰拖尾，可能的原因及解決方法：

　　1、溶劑效應(yīng)，需使用流動相稀釋樣品；

　　2、某些次級作用，調(diào)整流動相pH至少Pka±2；

　　3、過載，減少進(jìn)樣量或進(jìn)樣體積；

　　4、共流出，需確認(rèn)樣品的穩(wěn)定性，或調(diào)整流動相使共流出組分分離；

　　5、柱污染，加保護(hù)柱，或加強(qiáng)樣品或流動相前處理，或色譜柱沖洗及再生；

　　6、柱塌陷，更換色譜柱；

　　7、柱外效應(yīng)，需重新連接色譜柱，或更換連接管路；

　　峰分叉，可能的原因及解決方法：

　　1、柱污染，加保護(hù)柱，或加強(qiáng)樣品或流動相前處理，或進(jìn)行色譜柱沖洗及再生；

　　2、過載，減少進(jìn)樣量或進(jìn)樣體積；

　　3、柱塌陷，更換色譜柱；

　　4、柱篩板部分堵塞，加保護(hù)柱，或加強(qiáng)樣品或流動相前處理，或進(jìn)行色譜柱沖洗及再生，或反向沖洗色譜柱。

　　峰展寬，可能的原因及解決方法：

　　1、某些次級作用，調(diào)整流動相pH至少Pka±2；

　　2、過載，減少進(jìn)樣量或進(jìn)樣體積；

　　3、柱污染，加保護(hù)柱，或加強(qiáng)樣品或流動相前處理或進(jìn)行色譜柱沖洗及再生；

　　4、柱塌陷，更換色譜柱；

　　5、柱外效應(yīng)，重新連接色譜柱，更換連接管路。

　　四、雜峰

　　有雜峰出現(xiàn)，可能的原因及解決方法：

　　1、前一針的殘留，需改變測試方法，縮短分析時(shí)間；

　　2、流動相純度不夠，需保證流動相純度；

　　3、色譜柱污染，需清洗或更換色譜柱。這時(shí)也可能會導(dǎo)致保留時(shí)間的漂移，需要同時(shí)觀察色譜峰型、柱效、壓力的變化情況，推測色譜柱是否被污染。可以根據(jù)具體的測試條件來選擇適當(dāng)?shù)娜軇┻M(jìn)行色譜柱的沖洗，或更換新的色譜柱。為了延長色譜柱的使用壽命，增加保護(hù)柱是非常有效的方法。

　　五、保留時(shí)間

　　保留時(shí)間忽前忽后，可能的原因及解決方法：

　　1、流速變化導(dǎo)致，檢查儀器問題。觀察柱前壓力，如果壓力不穩(wěn)定或者偏離正常值，可能是泵流速不準(zhǔn)確或者有氣泡產(chǎn)生，出現(xiàn)保留時(shí)間的不穩(wěn)定，需要保證儀器流速的準(zhǔn)確性與穩(wěn)定性；

　　2、柱溫變化，使用柱溫箱，保證恒溫；

　　3、流動相變化，重新配制流動相。流動相中某種試劑的揮發(fā)，流動相中不同試劑的比例配制有誤，也會導(dǎo)致保留時(shí)間的變化，需要確認(rèn)流動相是否新鮮與正確；

　　保留時(shí)間提前或延后，可能的原因及解決方法：

　　1、色譜柱平衡不夠，需要考慮流動相是否已使色譜柱達(dá)到充分的平衡。一般情況下，流動相平衡色譜柱需要10-20個(gè)柱體積；但如果流動相中有使用弱酸、弱堿、緩沖鹽和離子對試劑，或者固定相為正相硅膠等，則需要更長的時(shí)間來平衡色譜柱；

　　2、色譜柱污染或受損，需更換色譜柱，或清洗再生色譜柱，或增加保護(hù)柱；

　　六、壓力

　　壓力高，可能的原因及解決方法：

　　1、系統(tǒng)壓力高，檢查儀器問題；

　　2、柱壓力高，需更換色譜柱，或清洗再生色譜柱，或增加保護(hù)柱；

　　壓力低，可能的原因及解決方法：

　　1、漏液，需檢查并重新擰緊漏液處；

　　2、流動相不對，需重新配制流動相；

　　3、色譜柱損壞，需更換色譜柱。

　　以上內(nèi)容只是對液相色譜中出現(xiàn)的常見的問題進(jìn)行了分析，在故障排除時(shí)要遵守以下原則：

　　(1)一次只改變一個(gè)因素，確定假定因素與問題之間的聯(lián)系;

　　(2)如果通過更換組件來排查故障時(shí)要注意將拆下的完好組件裝回原位，避免浪費(fèi);

　　(3)養(yǎng)成良好的記錄習(xí)慣，這是成功進(jìn)行故障排除的關(guān)鍵。

　　總之，在使用高效液相色譜時(shí)一定要注意樣品的前處理與儀器的正確操作和保養(yǎng)，則會大大延長儀器的使用壽命，并使儀器的性能得到大限度的發(fā)揮。